Stężenie mucyny w drogach oddechowych jako marker przewlekłego zapalenia oskrzeli czesc 4

George s Respiratory Questionnaire (SGRQ) 17 definiował przewlekłe zapalenie oskrzeli jako kaszel i flegmę prawie codziennie lub kilka razy w tygodniu. Rozedmę płuc zdefiniowano jako procent wokseli w polu płuc, który wykazywał osłabienie mniej niż -950 jednostek Hounsfielda, co oceniono za pomocą objętościowej tomografii komputerowej (CT) płuc. Korzystając z tego odsetka, zaklasyfikowaliśmy uczestnika jako mającego rozedmę płucną na podstawie wartości normatywnych.18 Szczegółowe definicje kliniczne są dostępne w dodatkowym dodatku. Plwocinę wywołaną przez inhalację hipertonicznej soli fizjologicznej zebrano od 917 uczestników, którzy mieli wymuszoną objętość wydechową w ciągu sekundy powyżej 35% wartości przewidywanej, zgodnie z protokołem 19 i American Thoracic Society oraz standardami Europejskiego Towarzystwa oddechowego, 16 dla pomiaru całkowitych stężeń mucyny. Indukowane próbki plwociny umieszczono w buforze guanidynowym (6 mol na litr), 12 wysłano do SPIROMICS Biospecimen Processing Center i przechowywano w temperaturze -4oC. Protokół SPIROMICS został zatwierdzony przez uczestniczące uniwersytety, a uczestnicy wyrazili pisemną świadomą zgodę. (Więcej informacji o badaniu i dostępie do danych SPIROMICS można znaleźć na stronie www.spiromics.org.)
Dane z kwestionariusza odzwierciedlającego klasyczną definicję przewlekłego zapalenia oskrzeli i dane na temat całkowitego stężenia mucyny w indukowanej plwocinie zostały również zebrane z jednoosobowej, 94-osobowej kohorty osób, które nigdy nie paliły oraz obecnych lub byłych palaczy z chronicznym zapaleniem oskrzeli lub bez niego. Techniki zbierania i pomiaru plwociny były identyczne z procedurami SPIROMICS.
Mucin Quantitation
Całkowite stężenia mucyny w plwocinie zmierzono za pomocą chromatografii wykluczania i refraktometrii różnicowej. Próbki plwociny wstrzyknięto do kolumn wykluczających wielkość, aby wyizolować mucyny, a ścieki przepuszczono przez fotometr laserowy (DAWN HELEOS II, Wyatt Technology), który połączono z refraktometrem (Optilab T-rEX, Wyatt Technology). Dane analizowano za pomocą oprogramowania ASTRA, wersja 6.1.1.7 (Wyatt Technology). Próbki plwociny do spektrometrii masowej opartej na monitorowaniu równoległym ilości MUC5B i MUC5AC zostały zredukowane, alkilowane i strawione trypsyną, a sześć wewnętrznych standardów peptydu MUC5B i MUC5AC wyznakowanych ciężkimi peptydami zostało dodanych do trawienia w plwocinie (szczegóły podano w Dodatku Dodatek). Próbki poddano ukierunkowanej analizie pozyskiwania niezależnych od danych jonów selektywnie wybranych jonów za pomocą hybrydowego kwadrupolowego spektrometru masowego Orbitrap ze źródłem nanorozmiarowym (Q Exactive, Thermo Scientific). Aby ocenić zanieczyszczenie śliny, 86 próbek zostało losowo wybranych ze wszystkich grup, a poziomy amylazy białka w ślinie zostały zmierzone przy użyciu podejścia z proteomiką bez etykiet 20.
Analiza statystyczna
Analizy statystyczne przeprowadzono przy użyciu oprogramowania SAS, wersja 9.4 (SAS Institute). Stężenie całkowitej mucyny, MUC5B i MUC5AC znormalizowano poprzez transformacje naturalnego logu. Analizę wariancji zastosowano do przetestowania wpływu zmiennych jakościowych na stężenia całkowitej mucyny, MUC5B i MUC5AC
[patrz też: neurolog wrocław, ginjal urit, asertin 50 opinie ]